离心式脱盐柱的使用步骤

G-Biosciences离心式脱盐柱Spin-OUT GT-1200 Medi的使用步骤

G-Biosciences Spin-OUT GT-1200，与Pharmacia的Sephadex G-50的功能类似，都是用来代替比较耗时的传统透析处理，以达到快速纯化蛋白/替换蛋白质缓冲液的目的，不过前者是离心式的，后者是重力式的。GT-1200适宜于纯化分子量大于12，000的蛋白质，有两种上样量规格的：Micro和Medi。没有现成的使用说明材料，听朋友介绍这是非常不错的品牌，在国外很火。感兴趣之余啃下其英文说明书了，先了解下其使用步骤：

一、使用前准备：

     1.上下颠倒数次，将管中的凝胶悬浮起来，然后100×g离心1min，让胶体回到管底。这里有两点需要注意的：1）新的柱子看过去几乎是透明的，不要认为什么填料都没有，其实是颗粒太细了；2）离心力是×g，在离心机上显示的是RCF这个单位，而不是RPM。这两个单位有本质区别，需要特别留意。其中：

     RPM(revolution per minute)为离心机每分钟的转数(单位:周/分钟)；RCF(relative centrifugal force)为相对离心力，以地心引力即重力加速度的倍数来表示，一般用×g表示。 两者转换关系如下： RCF=0.0011×r×RPM^2 RPM=(909×RCF÷r)^0.5 r为离心机转子半径(单位:米)。

      2.拔掉两头的塞子，将柱子放在10ml离心管中，1,000×g离心2min以移除储存buffer。离心完成后，即可看见白色的填充料。

二、开始使用（交换buffer）

1.  用缓冲液平衡柱子：加入1-2ml缓冲液，将柱子放到10ml离心管中，静置数分钟让缓冲液全部进入柱体后，再重复加入3-5次。zui后以1,000×g离心2min，弃掉收集到的溶液，以保证buffer被全部替换了。

2.  将柱子放到新的离心管中，缓慢加入蛋白质样品。注意，上样量为Medi的柱子zui多加入0.5ml样品，上样量为Micro的柱子zui多加入0.1ml样品。样品加在柱子中间的凝胶上，而不要碰到树脂部件。加样结束后静置1-2min，让凝胶充分将样品吸收。

3.  将柱子放到一个新的离心管中，1,000×g离心4min，即可获得纯化好样品了。

三、柱子的再生

1.  柱子可以重复利用。

2.  需要用到2×蛋白质洗脱buffer，用量是每1ml填料使用1ml buffer。

3.  加入洗脱buffer后静置5min。

4.  再用5倍填料体积的去离子水冲洗柱子。

5.  zui后用30% 的乙醇保存在4℃条件下。